Diabetologia：激活但功能受损的心灵Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞性疾病球蛋白到消失1改进型高血压诊疗腹泻的方面率在婴幼儿时期就有很好的详细描述，多个肝细胞性疾病球蛋白特征性的婴幼儿里有70%在血清转换后10年内患上高血压，而随访15年的婴幼儿这一比例降低到84%。来得之下，占诊疗1改进型高血压一半以上的改进型1改进型高血压的确诊机制还没给予充分的研究工作。

越来越多的人开始常用再行系统来定义1改进型高血压的方面：幼体在消失多种肝细胞性疾病球蛋白时转至第1下一阶段，消失血糖异常时转至第2下一阶段，消失腹泻时转至第3下一阶段。一些多发肝细胞性疾病球蛋白特征性的幼体，在1期和2期，方面较速度快，并发展为确诊的1改进型高血压。我们以前详细描述了一第三组在首次扫描到多种肝细胞性疾病球蛋白样本后多于10年无高血压的亦然速度快方面者，这第三组病变人数少，但特点更为一致。随后，我们发现肝细胞自身抗原抗体CD8+T蛋白加成在方面缓速度快的病变里基本不存在，但在早先确诊和长期存在的高血压病变里很更为容易扫描到。这也许确实，与方面病变来得，这些病变性疾病加成的调节弱化。

20世纪研究工作确实，尽管调节性T蛋白(Treg)总数正常，但高血压病变存在一些功能缺陷，其里包括对IL-2的加成能力也增大。此外，高血压病变里的现像CD4+T蛋白也许对调节凸显抵抗性，体现为现像T蛋白的可抑制减慢，自然产生的Treg和活体产生的作用于Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白里IL-2加成减慢。本研究工作的目的是详细描述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群亦然缓速度快方面者里的特点，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群蓝本的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病变亲族里检测1改进型高血压的凶险因素。我们以前详细描述了长期缓速度快方面者的特点，他们保持稳定多重肝细胞性疾病球蛋白特征性超过10年，但没消失高血压的诊疗腹泻，速度快性或非透过性性疾病。随后，10名继续保持稳定无高血压并愿意提供大量血液样本的缓速度快方面者纳入T和B蛋白功能深入研究。在目前的研究工作里，8名速度快方面者(SP第三组)，里位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肝细胞性疾病球蛋白特征性。所有的与会者都所处1改进型高血压方面的1期，尽管一些人随后保住了肝细胞性疾病球蛋白对某些抗原的特征性加成，然而，一名病变仍然所处2期多于6年，但没消失诊疗腹泻，一名病变被诊断为高血压，该患者72岁，在采集物理样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究里对该小分子透过了单独指标。裂解外周血单个核能蛋白(PBMCs)，改用多参数流式蛋白练成和T蛋白可抑制物理指标小分子里Treg的kHz、表改进型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、总括和回归)透过无监督聚类深入研究，指标Treg表改进型。

结果：与健康小分子来得，来自速度快方面体的无意识CD4+T蛋白的监督聚类揭示，酪氨酸的无意识CD4+ TregkHz降低，与糖皮质激素作用于的TNFR就其蛋白(GITR)暗示降低有关。一名HbA1c下降的病变与方面缓速度快者和匹配的对照第三组来得，Treg可知有所相同。功能最近，与健康小分子来得，来自缓速度快方面体的Treg介导的CD4+现像T蛋白可抑制明显受到破坏。体现为对现像CD4+T蛋白CD25和CD134暗示的可抑制降低。

绘出1 透彻的表改进型深入研究揭示，CD4+Treg亚改进型在速度快方面字段里降低。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有小分子的来时CD4+CD45RA -蛋白上。根据标示出物暗示鉴定出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;内核能Treg_1;内核能Treg_2;内核能Treg_3;和内核能Treg_4。(a)常用9个相同Treg标示出生成的10个元簇的MST。每个结点都是一个集群(100个集群)，更是大的元集群(10个元集群)在结点第三组周围上色。每个结点里的煎饼绘出暗示单个标示出的暗示级别。(b)每个元聚类的热绘出，以揭示连续性标示出暗示。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)生成绘出，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较总数级为每个metacluster盒两条路线绘出(总数级> 0.05%)确定为HD和SP第三组:内核能Treg_2 (e),内核能Treg_3 (f),内核能Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。深蓝色白点都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 常用CITRUS的预测模改进型确认，TregkHz的降低是方面缓速度快的徽标。分级门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都是性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示透过裂解，模拟FlowSOM群体。(b) HD(白点)和SP(白斑)第三组以及小分子SP 606(深蓝色)里CD25+ cd127的kHz汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的盒两条路线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(内核能Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核能Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核能Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核能T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示高强度着色，左下角突出的簇被标记为SP和HD字段错综复杂的相同。(j)盒两条路线绘出揭示了在SP(白斑)和HD(灰点)第三组里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比较总数级(比例)。(k)灰度揭示每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标示出比较暗示与或多或少暗示(蓝色);上列，内核能Treg_3;下面一行，内核能Treg_4。或多或少与所有其他簇里标示出的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出3 与健康献血者来得，方面缓速度快者无意识treg的GITR降低。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;内核能Treg_2;内核能Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个暗示标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的暗示热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR暗示结合，揭示灰度(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有小分子包括，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从分级门控，从所有HD(白色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)结合，揭示灰度(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出4 来自缓速度快方面的CD4+ treg蛋白遏制现像CD4+T蛋白的能力也增大。SP第三组用蓝色的两条路线和白点暗示，HD第三组用黑色的两条路线和白点暗示，深蓝色的两条路线/白点暗示小分子sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白透过分选。CD4+CD25−(此番者)被标示出为CFSE, Treg按观察的比例起始。用抗CD3 /28微珠来时化蛋白，培育出3天内透过流式蛋白练成扫描。(a-d)与CD4+此番者比较应的treg培育出(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育出。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制%-。常用特征性对照(酪氨酸的响应蛋白不含treg)量度可抑制%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 现像CD4+T蛋白对缓速度快方面的T蛋白来时化的可抑制更是敏感性。SP第三组用蓝色的两条路线和白点暗示，HD第三组用黑色的两条路线和白点暗示，深蓝色的两条路线/白点暗示小分子sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白透过分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示出，treg按观察的比例起始。用抗CD3 /28微珠来时化蛋白，培育出3天内透过流式蛋白练成(CD25反染)和蛋白因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培育出。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制调升(b)。(c,d) CD25可抑制调升(c)和CD134可抑制调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自缓速度快方面子的来时化无意识CD4+Treg在GITR暗示里给予了扩大和丰富，重申了进一步研究工作Treg在1改进型高血压风险幼体里的值得注意的必要性。

注解出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28